探讨芍药甘草附子汤对类风湿性关节炎的作用机理

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摘要：目的：探讨芍药甘草附子汤对类风湿性关节炎的作用机理。方法：48只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、雷公藤多甙组、芍药甘草附子汤组。除空白组外，各组大鼠复制类风湿关节炎模型，连续灌胃给药21天，采血测定白介素-1β（IL-1β）、前列腺素E2（PGE2）水平，取左踝关节组织观察病理改变。结果：芍药甘草附子汤组血清中IL-1β、PGE2明显降低，与模型组比较有显著性差异。关节病理损害明显改善。结论：芍药甘草附子汤能够降低IL-1β、PGE2含量从而减轻其对关节的侵害。

关键词：芍药甘草附子汤；类风湿性关节炎；IL-1β；PGE2

芍药甘草附子汤出自《伤寒论》，见于68条“发汗，病不解，反恶寒者，虚故也，芍药甘草附子汤主之。”由白芍、炙甘草、炮附子3味药组成，其中芍药酸苦，养血敛阴，柔肝止痛；甘草甘温，补中缓急，止痛；二药相合酸甘化阴，滋阴养血，缓急止痛；附子大辛大热，补火助阳，散寒止痛，与甘草相合辛甘化阳，附子性猛，得甘草而缓，芍药性寒，得附子而和。且芍药可破阴结，祛除经络中之瘀，甘草补中坚筋骨，附子走而不守，通脉散寒。本方虽小，但用药精炼，用治痹证包含祛除病因，改善临床症状等功能。并且毒副作用较小，易长期坚持服用。为探讨该方的作用机理，以其对弗氏完全佐剂关节炎(AA)大鼠的免疫调节及关节病理形态的影响为主要研究内容进行实验观察。

　　1实验材料

1．1实验动物

普通级健康Wistar大鼠48只［辽宁中医药大学动物实验中心提供，许可证号：SYXY（辽）2003-0019］，雌雄各半，体重（180±20）g，随机分为4组，即空白对照组（A组）、模型组（B组）、雷公藤多甙对照组（C组）、芍药甘草附子汤组（D组），每组各12只。

1．2药物

芍药甘草附子汤，由白芍、炙甘草、炮附子组成（药材由辽宁中医药大学附属医院中药房提供），大鼠用量按文献方法折算。药物经常规煎煮、过滤、水浴蒸发至每毫升含生药材0.78g，置4℃冰箱保存备用。雷公藤多甙(江苏美通制药有限公司，国药准字：Z32021007，批号：070115)，大鼠用量按文献方法折算。用蒸馏水稀释至每毫升含原药物0.001g备用。

1．3试剂

白细胞介素－1β（ELISA）试剂盒（上海西唐生物科技有限公司）。前列腺素E2(ELISA)试剂盒（北京北方伟业发展有限公司）。弗氏完全佐剂试剂盒（北京欣惠泽奥科技有限公司）。

1．4仪器

电热恒温水浴箱（HH.W21.Cr600,北京长安科学仪器厂）。飞鸽牌系列离心机（TDL-5-A）。

　　2实验方法

2．1模型复制

将大鼠适应性喂养1周，于B、C、D 3组大鼠每只右后足足垫常规消毒后皮内注射弗氏完全佐剂0.1mL，A组不造模。

2．2处理因素

造模第12天后，开始灌胃给药，每日1次。C组给予芍药甘草附子汤水煎液，按0.87mL/100g体重给药，A、B两组分别给予等量无菌生理盐水，D组给予雷公藤多甙水溶液，按1mL/100g体重给药。每周复查体重，及时调整药量。

2．3取材

于给药第21天后，用乌拉坦对大鼠进行腹腔麻醉，切开腹腔，用5mL注射器进行腹主动脉穿刺，抽取动脉血约3～5mL，离心后，取上清液待测。取左后足踝关节浸泡于福尔马林中固定备用。 

2．4指标检测

2．4．1形态学指标左后足踝关节上0.5cm处摘取肿胀足爪，常规固定，脱水，包埋，切片，HE染色，用光镜观察。

2．4．2理化指标采用酶联免疫法测定其炎症介质IL-1β、 PGE2水平，按照试剂盒说明书操作。

2．5统计方法

实验数据以均数±标准差（±s）表示，统计学分析采用单因素方差分析及秩和检验。应用SPSS10.0统计软件进行处理。

　　3结果

3．1芍药甘草附子汤对大鼠细胞因子的影响

结果见表1~2。模型组与空白组比较，IL-1β、PGE2明显升高（P＜0.01）；而芍药甘草附子汤组和雷公藤多甙组与模型组比较，IL-1β、PGE2 明显降低（P＜0.01，P＜0.05）。

3．2光镜下各组大鼠病变关节的病理改变

A组：关节软骨表层细胞较少，呈单个分布，深层细胞较大且成行分布，多层滑膜细胞排列较为疏松。

B组：淋巴细胞、浆细胞及巨噬细胞明显浸润，滑膜细胞明显增生，并蔓延跨过软骨表面，滑膜细胞增生形成的成纤维细胞、小血管和炎性细胞侵入形成的肉芽组织(血管翳)导致软骨表面糜烂、溃疡，并有软骨细胞溶解死亡，软骨和骨骺破坏。

C组：软骨细胞、骨细胞形态正常，滑膜细胞增生及炎性细胞浸润较B组明显减少。

D组：软骨细胞、骨细胞形态正常，仍有大量滑膜细胞增生及炎性细胞浸润。

　4讨论

4．1病因病机

我国远在公元前6世纪就有了这方面的记载，如《左传?昭公元年传》云：“风淫末疾”，就是指的一种因受风而得的四肢疾病。中医学虽无类风湿性关节炎的病名，但依据其临床症状，本病属于中医学“痹症”范畴，又可称为“周痹”、“历节”、“顽痹”、“骨痹”等。论痹首见于《内经》，《素问?痹论》“风寒湿三气杂至，合而为痹”认为风寒湿气夹杂侵袭人体，壅闭经络，闭阻气血是其病机。《普济方?诸风门》曰：“体虚肤空，掩护不谨，以致风寒湿之邪偏历关节”。主要是由于先天禀赋不足，身体素弱，腠理不固，掩护不当，以致风寒湿邪乘虚侵袭，流注经络、关节、肌肉，致气血津液运行不畅而成。可见本虚标实是本病的病机特点。本虚为气血、阴阳、脏腑亏损，标实为外受风寒湿热之邪。外邪内伤脾胃，运化功能失常，正气无力抗邪,邪气羁留日久，蕴结不解，闭阻气血经络，耗津损液，化燥伤阴,由轻至重,必渐耗伤肝肾，筋骨失养，最终致畸致残。

4．2中医药治疗

芍药甘草附子汤由白芍、炙甘草、炮附子3药组成，仲景原意用其治疗汗后阴阳两虚证。上已述及类风湿性关节炎（RA）的发病机制为先天禀赋不足，腠理不固，风寒湿邪乘虚侵袭，闭阻气血经络，最终耗损肝肾。方中白芍性微寒，味苦、酸；入肝、脾经，具有养血敛阴，柔肝止痛，平抑肝阳等作用，可“除血痹，通顺血脉。”炙甘草健脾益气补中，解百毒，缓急止痛，《神农本草经》曰其：“主五藏六腑，寒热邪气。坚筋骨，长肌肉，倍力。”《日华子本草》：“通九窍，利百脉，益精养气，壮筋骨”。二药相合酸甘化阴，滋阴养血，缓急止痛。附子大辛大热，可温壮心肾之阳，且温经散寒除湿止痹痛，《神农本草经》：“主风寒咳逆邪气，温中，金疮破癥坚积聚，血瘕，寒湿。痿躄，拘挛，膝痛，不能行步。”与甘草相合辛甘化阳，且附子性猛，得甘草而缓，与白芍相伍，一肾一肝，一刚一柔，一燥一润，一走一守，一气一血，肝肾并补，阴阳互调，既可温阳补肾，又可养阴柔肝,除湿柔筋止痛。RA病至后期，多表现为肝、肾、脾三脏不足，此与芍药甘草附子汤的功效主治基本相符，故本方能治该病。

4．3实验指标

大鼠佐剂性关节炎属于变态反应性免疫炎症反应：（1）IL-1β是关节软骨破坏的最重要的炎症介质。IL-1β可刺激急性期蛋白，凝血酶原激活物等产生，刺激T细胞活化，刺激胶原酶合成；IL-1β刺激成骨细胞分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，反过来使破骨细胞产生增加，导致骨质疏松；IL-1β可抑制软骨蛋白多糖的合成，使软骨降解。（2）PGE2：PGE2主要由成骨细胞合成，通过特异性受体的介导完成对骨组织代谢的调节。高浓度的PGE2可刺激软骨细胞及破骨细胞减少蛋白多糖的合成、加速其降解，并可促进滑膜纤维母细胞及软骨细胞产生释放蛋白水解酶、胶原酶，释放骨钙，导致软骨基质崩解、软骨吸收和骨破坏。

　　5结论

芍药甘草附子汤能明显地降低AA大鼠血清中IL-1β、PGE2含量(P＜0．05)，改善关节的病理损害,据此认为芍药甘草附子汤对治疗类风湿性关节炎有积极作用。本方仲景本意为治汗后阴阳两虚证，而对类风湿性关节炎亦有较好疗效，可见中医古方绝非专方专病，只要辨证相同，可广范用于多系统疾病。

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